Перейти к верхней панели

Как считать ретикулоциты?

Унифицированный метод подсчета количества ретикулоцитов после окраски их бриллиантовым крезиловым синим, азуром I или азуром II непосредственно на стекле или в пробирке (1972).

Принцип.

Суправитальная окраска красителями, выявляющими зернисто-нитчатую субстанцию ретикулоцитов.

Реактивы. Можно использовать один из следующих красителей.

1.Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать этанол 96 % в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.

2.Раствор азура I, предложенный П. Н. Кориковым: азур 1 — 1 г, аммония оксалат — 0,4 г, натрия хлорид- 0.8 г, этиловый спирт 96 % 10 мл, дистиллированная вода — 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2-3 дня в термостат при 37 °С и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.

3.Раствор азура II следующего состава: азур II 1 г, натрия цитрат 5 г, натрия хлорид, 0,4 г, дистиллированная вода 45 мл. Раствор оставляют в термостате при 37 °С на 2 сут, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15- 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтрую). Хранят в посуде из темного стекла.

Специальное оборудование. Микроскоп.

Ход определения.

Окраска на стекле.

Хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски, стеклографом. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3—4 мин (можно пользоваться чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги). Затем высушивают мазки на воздухе.

В приготовленных таким образом мазках эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция — в синий цвет.

Окраска в пробирке.

Метод 1: перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1 % раствора оксалата калия 4 капли раствора краски 1. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 мин. Перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2: в пробирку помещают 0,05 мл раствора краски 3 и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20-30 мин. Перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3: в пробирку помещают 0,3—0,5 мл раствора краски 2 и 5-6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку накрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1-2 часа (лучше окрашиваются ретикулоциты при экспозиции 2-3 ч). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

Подсчет ретикулоцитов.

В мазках эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в синий или синевато-фиолетовый цвет.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. Необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Практически для большей точности пользуются специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров. При равномерных тонких мазках, в которых эритроциты расположены в один ряд, подбирают такое поле зрения, в котором имеется, например, 50 эритроцитов, и затем просчитывают 20 таких полей зрения.

При отсутствии готового окуляра его можно легко приготовить, для чего отвинчивают окуляр 10Х, вкладывают в него кусок бумаги с вырезанным небольшим квадратиком и завинчивают.

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 1000 или на 100 эритроцитов.

3 А н я т и е № 2. Анемии и их классификация. Этиология, патогенез и лабораторные признаки анемий.

Цель занятия:

Изучить классификации анемий, их этиологию, патогенез, клинические проявления и методы диагностики различных видов малокровия.

Задачи занятия – студент должен:

З н а т ь:

— основные виды классификаций анемий (по патогенезу, цветовому показателю, типу кроветворения, степени тяжести, способности костного мозга к регенерации, размеру эритроцитов);

— этиологию анемий, клинические проявления и механизмы их развития;

— лабораторные признаки различных видов анемий;

У м е т ь:

— определять количество эритроцитов в крови с помощью камеры Горяева;

— оценивать содержание гемоглобина в крови с помощью гемометра Сали;

  • рассчитывать цветовой показатель;

  • определять в мазках крови патологические формы эритроцитов;

— определить вид анемии в исследуемом образце крови.

О з н а к о м и т ь с я:

— с современными методами диагностики анемий.

Автоматизированный подсчет ретикулоцитов в мазках периферической крови

Аннотация:

Ретикулоциты — молодые эритроциты, образующиеся в костном мозге из оксифильных нормобластов. После удаления ядра оксифильный нормобласт превращается в ретикулоцит, который за 4 дня дозревает до зрелого эритроцита. В костном мозге ретикулоциты находятся 1… 1,5 дня, а в периферической крови — 2…3 дня. Оценку количества ретикулоцитов используют при самых различных заболеваниях, а также выполняют при проведении профилактических и периодических медицинских осмотров здоровых людей. Для подсчета ретикулоцитов используют различные технологии. Традиционным методом оценки содержания ретикулоцитов в периферической крови является метод подсчета ретикулоцитов в мазках периферической крови, приготовленных из прижизненно (суправитально) окрашенных образцов крови. По этой технологии жидкую кровь смешивают с раствором красителя, инкубируют и из смеси крови и краски готовят мазок, который подвергают исследованию под световым микроскопом. Альтернативным подходом является определение ретикулоцитов путем подсчета на гематологическом анализаторе. По этой технологии клетки крови вначале смешивают с флуоресцентным красителем, связывающимся с нуклеиновыми кислотами, а затем анализируют в измерительном канале прибора при освещении лучом лазера. Идентификация клетки осуществляется после компьютерной обработки показателей преломления лучей лазера и оценки флуоресцентного сигнала. Каждая из технологий имеет свои преимущества и недостатки. В Российской Федерации большее распространение получил традиционный метод подсчета ретикулоцитов в окрашенном мазке крови. Современной тенденцией его развития стали автоматизация и компьютеризация исследования, в том числе с использованием технологии искусственного интеллекта, основанного на создании компьютерных нейронных сетей. Подобные методики разработаны и эффективно функционируют в различных сферах деятельности человека, в том числе при выполнении общего анализа крови. Следует учесть, что при оценке подобных приборов и технологий в качестве эталонного метода, с которым сравниваются результаты разрабатываемых приборов, в том числе гематологических анализаторов, приняты результаты световой микроскопии препаратов, выполненной опытным специалистом. В литературе имеется ограниченное количество публикаций, представляющих результаты сравнительной оценки технологии подсчета ретикулоцитов в окрашенном мазке крови ручным методом и при использовании сканер-анализаторов мазков крови. В связи с этим дальнейшее исследование различных технологий подсчета ретикулоцитов в мазках крови представляет определенный интерес. Цель исследования — изучить сравнительную эффективность ручного и автоматического способов подсчета числа ретикулоцитов в мазке периферической крови.

Авторы:

Соснин Д.Ю.
Онянова Л.С.
Фалков Б.Ф.
Кубарев О.Г.
Поздин Н.В.

Д. все перечисленные клетки

3.33. Клетки стромы костного мозга выполняют:

А. регуляцию гемопоэза

Б. опорную (механоциты)

В. функцию микроокружения

Г. трофическую функцию

Д. все перечисленное

3.34. Для эритробластов характерно:

А. изменение цвета цитоплазмы (базофильная, оксифильная) в зависимости от гемоглобинизации

Б. отсутствие нуклеол в ядре

В. различный размер клетки, в зависимости от ее зрелости

Г. колесовидная структура хроматина ядра с последующей пикнотизацией

Д. все перечисленное

3.35. Среди клеток костно — мозгового пунктата эритробласты составляют в среднем:

А. от 5 до 10%

Б. от 10 до 20%

В. от 25 до 30%

Г. от 30 до40%

Д. более 40%

3.36. Лейко–эритробластический индекс это:

А. отношение всех видов костного мозга ко всем клеткам эритроидного ряда

Б. отношение зрелых форм лейкоцитов ко всем клеткам эритроидного ряда

В. отношение незрелых лейкоцитов ко всем клеткам эритроидного ряда

Г. отношение эритроцитов к лейкоцитам периферической крови

Д. все ответы правильны

3.37. В норме лейко-эритробластический индекс в среднем составляет:

А. 1:1

Б. 1:2

В. 3:1

Г. 10:1

Д. отношение не нормируется

3.38. Увеличение бластов при клеточном или гиперклеточном костном мозге характерно для:

А. фолиеводефицитной анемии

Б. острой кровопотери

В. острого лейкоза

Г. инфекционного мононуклеоза

Д. всех перечисленных заболеваний

3.39. Термин «анизоцитоз» означает изменение:

А. формы эритроцитов

Б. диаметра эритроцитов

В. интенсивности окраски эритроцитов

Г. количества эритроцитов

Д. появление ядросодержащих эритроцитов в периферической крови

3.40. Анизоцитоз эритроцитов наблюдается при:

А. макроцитарных анемиях

Б. миелодиспластических синдромах

В. гемолитических анемиях

Г. хронического моноцитарного лейкоза

Д. всех перечисленных заболеваний

3.62. Прогрессирующая нормохромная анемия, нормальное количество лейкоцитов, в лейкограмме миелобласты. В костном мозге большое количество эритробластов, мегалобластов, миелобластов. Гемограмма характерна для:

А. лимфогранулематоза

Б. эритромиелоза

В. эритремии

Г. хронического миелолейкоза

Д. миеломной болезни

3.63. Костный мозг клеточный Л/Э=1/2; эритропоэз нормобластический; индекс созревания эритробластов =0,4. индекс нейтрофилов =0,9. Такая картина костного мозга характерна для:

А. острой постгеморрагической анемии в фазе костномозговой компенсации

Б. хронической постгеморрагической анемии

В. В12- дефицитной анемии

Г. гемолитической анемии

Д. всех перечисленных анемий

3.64. Костный мозг клеточный, индекс Л/Э =1/2, выраженная гиперплазия эритробластов, нормобластический тип кроветворения, индекс созревания эритробластов =0,8, индекс созревания нейтрофилов =0,9, мегакарио — цитарный росток неизменен. Пунктат костного мозга характерен для:

А. острой постгеморрагической анемии в фазе костномозговой компенсации

В. В12- фолиеводефицитной анемии

Г. начальной фазы острой постгеморрагической анемии

Д. всех перечисленных анемий

ОТВЕТЫ — РАЗДЕЛ 3. ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. -Г 3.19. -А 3.37. -В 3.55. -А 3.73. -Б 3.91. -Д 3.109. -А 3.127. -Д

3.2. -Д 3.20. -Б 3.38. -В 3.56. -Б 3.74. -Д 3.92. -Г 3.110. -Д 3.128. -В

3.3. -Д 3.21. -А 3.39. -Б 3.57. -В 3.75. -А 3.93. -Б 3.111. -Д 3.129. -Д

3.4. -Д 3.22. -Г 3.40. -Д 3.58. -А 3.76. -Б 3.94. -Г 3.112. -Д 3.130. -В

3.5. -Б 3.23. -А 3.41. -Д 3.59. -Б 3.77. -А 3.95. -А 3.113. -А 3.131. -А

3.6. -Г 3.24. -В 3.42. -Д 3.60. -В 3.78. -Д 3.96. -Д 3.114. -А 3.132. -А

3.7. -Д 3.25. -А 3.43. -Б 3.61. -Б 3.79. -А 3.97. -В 3.115. -Б 3.133. -Д

3.8. -Д 3.26. -А 3.44. -Б 3.62. -Б 3.80. -А 3.98. -А 3.116. -Б 3.134. -Г

3.9. -Д 3.27. -В 3.45. -Б 3.63. -Б 3.81. -Г 3.99. -Д 3.117. -В 3.135. -А

3.10. -А 3.28. -Г 3.46. -Г 3.64. -А 3.82. -В 3.100. -Г 3.118. -Д 3.136. -А

3.11. -В 3.29. -Б 3.47. -Б 3.65. -Г 3.83. -Г 3.101. -А 3.119. -А 3.137. -Д

3.12. -В 3.30. -Д 3.48. -В 3.66. -Д 3.84. -А 3.102. -В 3.120. -Г 3.138. -В

3.13. -Д 3.31. -А 3.49. -А 3.67. -Б 3.85. -Г 3.103. -Д 3.121. -Д 3.139. -Б

3.14. -А 3.32. -Д 3.50. -Г 3.68. -Г 3.86. -Б 3.104. -А 3.122. -В 3.140. -Г

3.15. -Г 3.33. -Д 3.51. -Д 3.69. -А 3.87. -Д 3.105. -Д 3.123. -Г 3.141. -Г

.. 8 9 10 11 ..

РАЗДЕЛ 3. ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. КВАЛИФИКАЦИОННЫЕ ТЕСТЫ С ОТВЕТАМИ

ОБЩИЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ. КВАЛИФИКАЦИОННЫЕ ТЕСТЫ С ОТВЕТАМИ

3.1. Унифицированный метод подсчета эритроцитов:

А. в автоматическом счетчике

Б. в камере Горяева

В. фотоколориметрический

Г. и в автоматическом счетчике и в камере Горяева

Д. нет правильного ответа

3.2. Источником ошибок при подсчете эритроцитов в камере Горяева могут служить:

А. подсчет клеток ранее, чем через одну минуту после заполнения камеры

Б. образование сгустка, поглотившего часть клеток

В. меньшее количество сосчитанных квадратов, гемолиз эритроцитов

Г. неправильное притирание покровных стекол

Д. все перечисленное

3.3. Источником ошибок при определении СОЭ могут служить:

А. неправильное соотношение между цитратом натрия и кровью

Б. образование сгустка

В. наклонное положение капилляров в штативе

Г. несоблюдение температурного режима

Д. все перечисленное

3.4. К ускорению СОЭ не приводят:

А. повышение содержания фибриногенов

Б. повышение содержание глобулиновых фракций

В. изменение в крови содержания гаптоглобулина и альфа-2-макроглобулина

Г. нарастание в крови концентрации патологических иммуноглобулинов

Д. увеличение концентрации желчных кислот

3.5. При микросфероцитозе кривая Прайс-Джонса:

А. сдвигается вправо

Б. сдвигается влево

В. появляется несколько пиков

Г. не меняется

Д. все ответы правильны

3.6. При овалоцитозе и мегалоцитозе изменяются:

А. большой диаметр эритроцитов

Б. меньший диаметр эритроцитов

В. разница между большим и малым диаметром

Г. оба диаметра

Д. все перечисленное верно

3.7. Наследственные дефекты мембраны эритроцитов приводят к:

А. микросфероцитозу

Б. овалоцитозу

В. стоматоцитозу

Г. акантоцитозу

Д. все перечисленное верно

3.8. Эритроцитоз, вызванный повышенным образованием эритропоэтина, характерен для:

А. анемий при печеночной недостаточности

Б. полицитемии

В. болезни и синдрома Иценко-Кушинга

Г. гипергидратации

Д. всего перечисленного

3.9. Для определения количества ретикулоцитов рекомендуется методика окраски:

А. на окрашенном стекле во влажной камере

Б. в пробирке

Д. в пробирке и на окрашенном стекле во влажной камере

3.10. Для выявления зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов рекомендуется краситель:

А. бриллиант — крезиловый синий

Б. азур 1

В. азур 2

Г. метиленовый синий

Д. все перечисленное верно

3.11. Увеличение количества ретикулоцитов имеет место при:

А. апластической анемии

Б. гипопластической анемии

В. гемолитическом синдроме

Г. метастазах рака в кость

Д. все перечисленное верно

3.12. Не сопровождается повышением количества ретикулоцитов в периферической крови:

А. гемолитическая анемия

Б. постгеморрагическая анемия

В. анемия при лучевой болезни

Г. мегалобластные анемии на фоне лечения

Д. все ответы правильные

3.13. Основную массу ретикулоцитов в периферической крови здорового человека составляют:

Б. клубкообразные

Г. неполносетчатые

А. микросфероцитарной гемолитической анемии

Г. параксизмальной ночной гемоглобинурии

3.15. Для фиксации мазков крови не используют:

Б. фиксатор-краситель Май-Грюнвальда

В. этиловый спирт 96%

Г. этиловый спирт 70%

Д. фиксатор-краситель Лейшмана

3.16. Для окраски мазков крови применяются методы:

А. по Нохту

Б. по Паппенгейму

В. по Романову

Г. все перечисленные методы

А. приеме противотуберкулезных препаратов

Б. отравлении свинцом

В. железодефицитных анемиях

Г. миеломной болезни

Д. гемолитической анемии

3.46. В основу работы большинства гематологических анализаторов положены:

А. метод Культера

Б. кондуктометрический метод

В. импеданстный метод

Г. все выше перечисленные методы являются синонимами

Д. у каждой фирмы свой метод

3.47. Абсолютное увеличение количества базофилов в периферической крови характерно для:

А. острых лейкозов

Б. хронических миелопролиферативных заболеваний

В. аллергических состояний

Г. лечения эстрогенами

Д. все перечисленное верно

3.48. Абсолютный нейтрофилез характерен для:

А. апластической анемии

Б. лечения цитостатиками

В. сепсиса

Г. хронических бактериальных инфекций

Д. все перечисленное верно

3.49. Относительный лимфоцитоз наблюдается при:

А. токсоплазмозе

Б. хроническом миелолейкозе

В. приеме кортикостероидов

Г. вторичных иммунодефицитах

Д. злокачественных новообразованиях

3.50. Абсолютный моноцитоз характерен для:

А. бактериальных инфекций

Б. заболеваний, вызванных простейшими

В. коллагенозов

Г. моноцитарного и миеломоноцитарного лейкозов

Д. все перечисленное верно

3.51. Тромбоцитопения характерна для:

А. краснухи новорожденных

Б. лучевой болезни

В. ДВС-синдрома

Г. ВИЧ-инфекции

Д. все перечисленное верно

3.52. Плазмоциты (2-4%) в периферической крови обнаруживают при:

А. вирусных инфекциях

Б. состоянии после облучения

В. коллагенозах

Г. новооборазованиях

Д. все перечисленное верно

3.53. Клетки Березовского-Штернберга и Ходжкина в лимфоузлах- основные диагностические элементы:

А. лимфогранулематоза

Б. гистиоцитоза

В. саркоидоза

Г. острого лейкоза

Д. все перечисленное верно

А. начальной

Б. развернутой

В. обострения

Г. бластного кризиса

Д. ни одной из перечисленных

Б. развернутой

В. обострения

Г. бластного кризиса

Д. ни одной из перечисленных

А. начальной

Б. развернутой

В. обострения

Г. бластного кризиса

Д. ни одной из перечисленных

А. начальной

30 Май, 2020 | admin | No Comments

Write Reviews

Leave a Comment

Please Post Your Comments & Reviews

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *